总页 ꄲ 免疫组学 ꄲ 10x单细胞TCR/BCR测序

产品概述

适应性免疫系统通过T细胞受体（TCR）和B细胞受体（BCR）识别并响应特定抗原。TCR和BCR的巨大多样性来源于V(D)J基因重排、连接多样性以及B细胞的体细胞超突变，理论上可产生超过1015种独特受体序列。从而使免疫系统能够应对各种病原体，但在肿瘤、感染、自身免疫病等复杂微环境中，不同细胞的TCR/BCR克隆呈现显著异质性。

传统bulk TCR/BCR-seq只能提供群体平均信息，难以解析单个细胞的受体序列并与其功能状态（基因表达、表型）关联。10x scTCR/BCR-seq基于Chromium微流控平台，实现单细胞水平的全长、配对TCR（αβ链）或BCR（重链+轻链）序列检测，同时可联合基因表达和细胞表面蛋白分析，助力单细胞分辨率下绘制免疫组库图谱，揭示克隆扩增、细胞异质性和免疫响应机制。

技术原理

10x scTCR/BCR-seq 是基于5'端捕获和微流控单细胞技术的免疫组库分析方法。其核心原理是通过GEM（Gel Bead-in-Emulsion）技术将单个细胞包裹在油滴中，进行全长cDNA合成和细胞特异性barcode标记，再通过特异性引物富集TCR/BCR序列，实现配对、全长受体序列检测。

主要实验流程：

1.单细胞悬液制备：制备高质量单细胞悬液（推荐细胞活力>80%）。
2.GEM生成与逆转录：使用Chromium控制器将单个细胞与携带barcode的凝胶珠包裹进GEMs中，进行5'端捕获的逆转录，生成带细胞barcode的全长cDNA。
3.cDNA扩增与V(D)J富集：扩增全长cDNA后，使用针对TCR/BCR恒定区（constant region）的特异性引物进行PCR富集，获得全长、配对的TCR（α+β）或BCR（IgH+IgL）序列。
4.文库构建与测序：构建基因表达文库和V(D)J富集文库，进行高通量测序。
5.生物信息学分析：Cell Ranger软件处理数据 → 细胞barcode分配 → TCR/BCR组装（配对链）→ 克隆分型、V/J基因使用、CDR3序列分析 → 与基因表达数据整合（Seurat/Loupe等）。

应用场景

单细胞分辨率的免疫组库分析在适应性免疫研究中至关重要，10x scTCR/BCR-seq 应用场景极其广泛，尤其适用于异质性强的免疫相关样本。

常见应用包括：

1.肿瘤免疫微环境研究：解析肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）的TCR/BCR克隆扩增、耗竭状态及抗原特异性克隆；
2.感染与疫苗响应：追踪感染或疫苗接种前后抗原特异性T/B细胞克隆动态及亲和力成熟；
3.自身免疫病与过敏：鉴定自身反应性克隆及其功能表型；
4.CAR-T与免疫治疗：评估治疗前后免疫组库变化、克隆持久性和脱靶效应；
5.移植排斥与GVHD：监测供受体克隆嵌合与排斥相关克隆；

服务流程

产品对比

维度	Bulk免疫组库 Bulk TCR/BCR-seq	单细胞免疫组库 scTCR/scBCR
细胞分辨率	混合所有细胞，无法区分单个细胞	单个细胞水平
链配对信息	丢失 α-β / VH-VL 天然配对信息	保留完整配对信息
细胞表型关联	无	可同时获得转录组/表面蛋白
克隆型分辨	只能获得频率信息	可追踪克隆扩张与异质性
适用场景	高深度多样性、稀有克隆鉴定、V/J 使用偏好	功能关联、克隆动态、治疗响应
成本与通量	较低，适合大样本	较高，但信息量极大
主要局限	无法知道哪个链来自哪个细胞	通量相对较低、成本较高