产品概述
适应性免疫系统是脊椎动物抵御病原体和异常细胞的核心防御机制，主要依赖T淋巴细胞（T细胞）和B淋巴细胞（B细胞）。T细胞受体（TCR）和B细胞受体（BCR）是它们识别抗原的关键分子。通过V(D)J基因重排、连接多样性（junctional diversity）和体细胞超突变等机制，TCR和BCR形成了极其庞大多样性的免疫组库，理论上可产生超过1015种不同的受体序列。
TCR主要由αβ链（或γδ链）组成，BCR由重链（IgH）和轻链（Igκ/Igλ）组成，其中互补决定区3（CDR3）是决定抗原特异性的核心区域。免疫组库的动态变化直接反映机体的免疫状态：在感染、疫苗接种、自身免疫病、肿瘤微环境和移植排斥等过程中，特定克隆会发生扩增或收缩。基于多重PCR的TCR/BCR-seq，能够直接捕获基因组水平的重排信息（包括非生产性重排），适用于克隆定量和总多样性评估，是研究适应性免疫系统多样性和动态变化的重要工具。
技术原理
多重PCR TCR/BCR-seq（DNA模板） 是基于多重引物PCR扩增和高通量测序的免疫组库分析技术。其核心原理是利用针对TCR/BCR基因V区、J区或C区设计的一组特异性引物，在同一反应体系中同时扩增大量不同的重排序列，再通过高通量测序获得CDR3等关键区域的序列信息。
主要实验流程：
- 1.基因组DNA提取与质量控制：从外周血、组织或细胞中提取高质量gDNA（推荐浓度高、完整性好）。
- 2.多重PCR扩增：使用多组上游V区引物和下游J区/C区引物进行多重PCR（常采用2步或优化循环数以降低偏好性），特异性扩增重排的TCR/BCR基因片段（重点覆盖CDR3区域）。
- 3.文库构建与测序：对PCR产物进行纯化、接头添加、PCR富集，构建测序文库，进行高通量测序。
- 4.生物信息学分析：原始数据质控 → 去接头与UMI处理 → 比对到IMGT参考数据库 → CDR3提取与克隆分型 → 多样性分析（Shannon指数、克隆度）、克隆扩增、V/J使用频率、共享克隆分析等。
结果解读：测序reads对应不同克隆的丰度，可精确反映免疫组库的多样性、克隆组成和动态变化。DNA模板方法每个细胞仅有一个DNA模板，更适合绝对定量克隆频率。
应用场景
免疫组库在适应性免疫应答中动态变化，多重PCR TCR/BCR-seq（DNA模板） 广泛应用于需要精确克隆定量和基因组水平分析的场景。常见应用包括：
- 1.感染与疫苗研究：监测病原体感染或疫苗接种前后TCR/BCR克隆扩增和多样性变化；
- 2.肿瘤免疫：分析肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）的TCR/BCR组库，鉴定肿瘤特异性克隆和免疫治疗响应标志物；
- 3.自身免疫病与过敏：研究自身反应性克隆的扩增及其与疾病进展的关系；
- 4.移植排斥与GVHD：监测供受体免疫组库嵌合与排斥相关克隆；
- 5.药物开发与疗效评估：评估免疫检查点抑制剂、CAR-T等疗法对免疫组库的影响；
- 6.基础免疫学：探索T/B细胞发育、记忆形成及免疫老化过程中的组库动态。
服务流程
产品对比
| 对比维度 | 多重PCR（DNA模板） | 5'RACE（RNA模板） | 主要差异意义 |
| 模板类型 | 基因组DNA (gDNA) | 总RNA / mRNA（需逆转录为cDNA） | DNA更稳定，RNA反映表达水平 |
| 检测对象 | 基因组水平V(D)J重排（包括非生产性重排） | 表达的转录本（功能性受体） | DNA适合绝对克隆频率定量，RNA反映功能表达 |
| 覆盖区域 | 主要CDR3区域（V-J或V-D-J） | 全长可变区（CDR1、CDR2、CDR3，常可覆盖FR区） | 5'RACE 提供更完整序列信息 |
| 定量准确性 | 高（每个细胞1-2个DNA拷贝，接近绝对定量） | 中等（受转录活性、mRNA丰度影响） | DNA更适合克隆频率精确比较 |
| 偏好性 | 存在多重引物扩增偏好（可通过UMI或优化缓解） | 较低（模板转换或单侧扩增，偏好性小） | 5'RACE 更接近真实比例 |
| 实验复杂度 | 中等（主要为多重PCR引物设计优化） | 较高（需RNA逆转录 + 5'RACE特异步骤） | 多重PCR实验操作相对简单 |
| 主要优势 | 稳定模板、绝对定量、非表达序列也能捕获、适合纵向追踪和MRD检测 | 反映真实表达水平、全长序列、偏好性低、适合功能研究 | 两者互补，DNA偏定量，RNA偏功能 |
| 主要局限 | 无法反映表达水平、不能检测体细胞超突变（BCR） | RNA易降解、受转录活性干扰、不能捕获非表达重排 | DNA更稳定，RNA更易受样本质量影响 |
| 典型应用场景 | 克隆频率定量、MRD监测、移植排斥、纵向追踪 | 表达谱分析、疫苗响应、功能克隆鉴定、肿瘤浸润淋巴细胞功能研究 | 根据研究目标选择或联合使用 |
| 生物信息学难度 | 中等 | 稍高（需处理转录本拼接） | DNA分析相对简单 |
代表性结果
VJ基因对使用频率
克隆性分析
克隆型追踪
多重PCR TCR/BCR-seq
